(Flow cytometry , FCM ) ay isang cell analyzer na sumusukat sa fluorescence intensity ng mga stained cell marker. Ito ay isang high-tech na teknolohiya na binuo batay sa pagsusuri at pag-uuri ng mga solong cell. Mabilis nitong nasusukat at nauuri ang laki, panloob na istraktura, DNA, RNA, mga protina, antigen at iba pang pisikal o kemikal na katangian ng mga selula, at maaaring batay sa koleksyon ng mga klasipikasyong ito.
Ang flow cytometer ay pangunahing binubuo ng sumusunod na limang bahagi:
1 Flow chamber at fluidics system
2 Laser light source at beam shaping system
3 Optical system
4 Electronics, storage, display at analysis system
5 Sistema ng pag-uuri ng cell
Kabilang sa mga ito, ang laser excitation sa laser light source at beam forming system ay ang pangunahing pagsukat ng fluorescence signal sa flow cytometry. Ang intensity ng excitation light at ang exposure time ay nauugnay sa intensity ng fluorescence signal. Ang laser ay isang magkakaugnay na pinagmumulan ng liwanag na maaaring magbigay ng single-wavelength, high-intensity, at high-stability na pag-iilaw. Ito ang perpektong mapagkukunan ng liwanag ng paggulo upang matugunan ang mga kinakailangang ito.
Mayroong dalawang cylindrical lens sa pagitan ng laser source at ng flow chamber. Ang mga lente na ito ay nakatutok sa isang laser beam na may pabilog na cross-section na ibinubuga mula sa laser source patungo sa isang elliptical beam na may mas maliit na cross-section (22 μm × 66 μm). Ang enerhiya ng laser sa loob ng elliptical beam na ito ay ipinamamahagi ayon sa isang normal na distribusyon, na tinitiyak ang pare-parehong intensity ng pag-iilaw para sa mga cell na dumadaan sa lugar ng pagtuklas ng laser. Sa kabilang banda, ang optical system ay binubuo ng maraming hanay ng mga lente, pinholes, at mga filter, na maaaring halos nahahati sa dalawang grupo: upstream at downstream ng flow chamber.
Ang optical system sa harap ng flow chamber ay binubuo ng isang lens at pinhole. Ang pangunahing function ng lens at pinhole (karaniwan ay dalawang lens at isang pinhole) ay upang ituon ang laser beam na may pabilog na cross-section na ibinubuga ng laser source sa isang elliptical beam na may mas maliit na cross-section. Ibinabahagi nito ang enerhiya ng laser ayon sa isang normal na distribusyon, na tinitiyak ang pare-parehong intensity ng pag-iilaw para sa mga cell sa buong lugar ng pagtuklas ng laser at pinapaliit ang interference mula sa ligaw na liwanag.
Mayroong tatlong pangunahing uri ng mga filter:
1: Long pass filter (LPF) - pinapayagan lamang ang liwanag na may mga wavelength na mas mataas kaysa sa isang partikular na halaga na dumaan.
2: Short-pass filter (SPF) - pinapayagan lamang ang liwanag na may mga wavelength na mas mababa sa isang partikular na halaga na dumaan.
3: Bandpass filter (BPF) - pinapayagan lamang ang liwanag sa isang partikular na hanay ng wavelength na dumaan.
Maaaring idirekta ng iba't ibang kumbinasyon ng mga filter ang mga fluorescence signal sa iba't ibang wavelength sa mga indibidwal na photomultiplier tubes (PMTs). Halimbawa, ang mga filter para sa pag-detect ng green fluorescence (FITC) sa harap ng PMT ay LPF550 at BPF525. Ang mga filter na ginamit upang makita ang orange-red fluorescence (PE) sa harap ng PMT ay LPF600 at BPF575. Ang mga filter para sa pag-detect ng pulang fluorescence (CY5) sa harap ng PMT ay LPF650 at BPF675.
Ang daloy ng cytometry ay pangunahing ginagamit para sa pag-uuri ng cell. Sa pagsulong ng teknolohiya ng kompyuter, pag-unlad ng immunology at pag-imbento ng monoclonal antibody na teknolohiya, ang mga aplikasyon nito sa biology, medisina, parmasya at iba pang larangan ay lalong lumaganap. Kasama sa mga application na ito ang pagsusuri sa cell dynamics, cell apoptosis, pag-type ng cell, diagnosis ng tumor, pagsusuri sa pagiging epektibo ng gamot, atbp.
Oras ng post: Set-21-2023
